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Clinique vétérinaire les Poumadères
Clinique vétérinaire "les Poumadères" - Centre de Reproduction des Carnivores du Sud-Ouest (CRECS)

Banque semence : congélation et stockage au CRECS

REALISATION PRATIQUE D'UNE CONGELATION DE SPERMATOZOIDE

 

1    Avant le prélèvement de sperme au CRECS

- Vérification de l’attestation de propriété ou de l'autorisation signée du propriétaie
- Commémoratifs sur le passé reproducteur de l’étalon
- Préparation des paillettes
- Prélèvements en vue d’une identification génétique si chien LOF(recommandé) et de sérologie (brucellose canine).

2.    Avant le prélèvement de sperme au CRECS

 

- Afin d'optimiser la qualité de semence, l'idéal est de prélever votre chien 5 à 15 jours avant  votre venue.

Ce prélèvement permet d'habituer le chien à cette méthode (si celui-ci n'a jamais été prélevé), de vérifier "grossièrement" que la semence n'a pas de défaut apparent (quantité, mobilité des spermatozoïdes, urines, sang, etc.).
Ainsi, vous pourrez venir pour la congélation de semence en étant assurés que nous pourrons congeler la semence de votre chienne. Cela évite une perte de temps pour tout le monde et un coût inutile pour vous (frais de dossier de congélation et frais de prélèvement).


3.    Le prélèvement de semence au CRECS


- ll est toujours plus facile et efficace, si vous amenez une chienne en chaleurs (surtout si votre chien n'a jamais été prélevé). Sinon, notre centre possède différents moyens de stimuler le chien : chienne en chaleur, etc.

- Séparation des trois fractions du sperme, seule la deuxième fraction dite spermatique est conservée. Elle contient la majeure partie des spermatozoïdes de l’éjaculat.
- Prévoir de rester sur la journée si plusieurs prélèvements sont nécessaires pour obtenir le nombre de doses souhaitées
En général, 1 prélèvement permet de stocker suffisamment pour inséminer entre 2 et 5 chiennes selon la race et la qualité de l’éjaculat.
 
4.    Examen du sperme


- Aspect : les échantillons contenant du sang en quantité sont éliminés
- Examen de la mobilité au microscope à contraste de phase et d’une platine chauffante. Le paramètre important est la mobilité traçante et non uniquement la mobilité globale apparante.
- Calcul de la concentration à l’aide d’un densitomètre (Spermacue ND) et au besoin par comptage manuel (cellule hématométrique).
- Recherche d’anomalies des spermatozoïdes : différentes méthodes colorimétriques permettent de comptabiliser l’ensemble des malformations speramtiques pouvant entrainer une dégradation de la fertilité.


Hors demande spéciale, ne sont conservés que les éjaculats contenant plus 150 millions de spermatozoïdes, dont la mobilité immédiate est supérieure à 70 % et dont les formes anormales des spermatozoïdes sont inférieures à 30%.

 

5.    Préparation du sperme dans un dilueur spécifique à la congélation et mise en paillettes identifiées 


6.    La congélation proprement dite est réalisée


La méthode de descente en température à 196°C nous permet d'optimiser la réussite et conserver la meilleure qualité potentielle.

 

7.    Contrôle de qualité post congélation

Ne sont conservés uniquement les spermes dont la mobilité post-décongélation est supérieure à 50% (hors demande spéciale). Dans la majorité des cas, la mobilité traçante post-décongélation varie entre 65 et 80%.
Le test est effectué dans les huit jours suivant la congélation. Un test en urgence peut-être réalisé dans des cas particuliers.
Un rapport détaillé est envoyé par email : spermogramme complet, nombre de paillettes stockées, nombre de doses inséminantes.


8.    Conservation des paillettes dans l’azote liquide à -196°C.


Bâtiment dédié au stockage et sécurisé. Cuves sous contrôle permanent.


Calcul du nombre de doses stockées (insemintations possibles)


Quelques définitions pour comprendre :
- PAILLETTE (straw) correspond au contenant pour les spermatozoïdes.
Le nombre de spermatozoïde par paillette est imposé par la technique permettant de congeler avec qualité (fertilité et prolificité) : 1 paillette doit contenir entre 70 et 100 millions de spermatozoïdes.
Tous les spermatozoïdes stockés dans la paillette ne sont pas vivants mais on ne peut pas les séparer des autres (sans perte excessive). De plus, la congélation engendre la perte d’un pourcentage des spermatozoïdes (entre 20 et 40%) selon le chien.
Ainsi, 1 paillette contient entre 40 et 60 millions de spermatozoïdes vivants et mobiles à la décongélation.
Ex : 1 paillette contenant 80 milliions de spz.
Mobilité vivants avant congélation : 90 % soit 72 millions de spz
Mobiles vivants après congélation (au test) : 65 % soit 52 millions de spz


- DOSE INSEMINANTE correspond à la quantité de spermatozoïdes à utiliser pour 1 insémination sur le cycle d’une chienne.
L’ensemble des Centres de Référence dans le monde recommandent l’utilisation d’un minimum de 150 millions de spermatozoïdes vivants mobiles (post-thaw motile sperm, en anglais). On calcule le nombre de paillettes nécessaire pour arriver à 150 millions. En moyenne, 3 paillettes par insémination.
1 dose = 150 millions de spermatozoïdes mobiles post-décongélation
Pour indication :
200 millions de mobiles post-décongélation à  > 85 % de gestation*
150-200        ‘’                     ‘’                   à  > 80 %        ‘’         ‘’
120-150        ‘’                     ‘’                   à   50-60 %     ‘’         ‘’
< 120             ‘’                     ‘’                 à   < 50 %       ‘’         ‘’
 
* le suivi d’ovulation pendant les chaleurs est le deuxième facteur crucial à la réussite.
 
- UNITE DE STOCKAGE est définie comme base de calcul pour l’espace nécessaire dans les cuves d’azotes pour stocker les paillettes.  1 unité de stockage peut contenir entre 1 et 5 paillettes.

 


 COUT D'UNE CONGELATION ET DU STOCKAGE AU CRECS

Nous pouvons vous renseigner en détail par email : vetreproduction@gmai.com